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適用于不同反應(yīng)體積的重組酶聚合酶等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù):4645 更新時(shí)間:2017-07-17

采用PCR或等溫?cái)U(kuò)增的方法來擴(kuò)增DNA(或RNA)時(shí),反應(yīng)溫度在50℃以上,反應(yīng)體積介于10-100 ul之間,并且可能需要在樣品上覆蓋一層油性物質(zhì)或采取相似的封閉操作。這是因?yàn)?,在反?yīng)的過程中伴隨的蒸發(fā)現(xiàn)象致使反應(yīng)體積不可過小,另一方面,較大的反應(yīng)體積會(huì)消耗更多的耗材,并且在循環(huán)擴(kuò)增過程中無法有效的進(jìn)行溫度控制(達(dá)到預(yù)定的溫度需要較長的時(shí)間)。TwistDx’s提出的重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)技術(shù)對這一難題給出了解決方案。重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)可在低溫(通常在37-42℃,可以在更低溫度下進(jìn)行)下進(jìn)行,反應(yīng)迅速,用時(shí)短(通常在3-15 min完成反應(yīng)),即便不在反應(yīng)體系上覆蓋油層或采取其它的密封措施仍可大大降低蒸發(fā)造成的影響。低溫運(yùn)行,可有效防止背景噪聲,使結(jié)果更,即便需要更長的時(shí)間達(dá)到*反應(yīng)溫度也不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,RPA技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于,既可用于微體積反應(yīng)(數(shù)字方法),也可用于大體積反應(yīng)體系,例如具有簡單生物樣本的低復(fù)雜性分子檢測。文中展示了RPA技術(shù)用于不同體積反應(yīng)體系的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,反應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)的PCR管(0.2 ml)中進(jìn)行,各反應(yīng)體系均未采取油密封或其它密封操作。

 

原文:

Recombinase Polymerase Amplification (RPA) an isothermal technique suitable for a range of applications- Evaluation of RPA volume tolerance. BioTechniques 62:190 (April 2017).

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